睿信生物 山羊微晶纤维素酶MCCaseelisa试剂盒

公司介绍     

生物 分析方法开发

分析方法验证

高品质科研elisa试剂盒、化学发光试剂盒开发与定制

供科研使用，不得用于临床检验。

泉州市睿信生物科技有限公司是集研发、生产、销售、服务及品牌代理为一体的生物技术公司，目前可提供各种抗体、免疫学试剂盒、生化试剂、分子生物学试剂等高品质产品及服务，涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。依托湖北武汉、江苏南京、福建泉州三大研发及销售 ，布局全国市场。

我们致力于为高等院校、研究机构、诊断试剂厂家、生物制药公司、动物造模公司等科研单位，提供高质量检测试剂盒、方法学开发及实验外包服务，为客户的科学研究提供可靠的技术支持。公司干技术人员均有10年以上的从业经验，是值得您信赖的科研伙伴！

企业建立了完善的研发系统和生产设备，并与知名高校、研究机构、 企业等建立战略合作关系。公司自成立以来，就非常注重企业信息化的建设，我们采用了先进的内部供应链信息处理平台，保证客户的需求可以准确、 处理。

      为每一位科研人员献上高品质的产品及服务是我们的使命。

样本处理：

1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

注意事项:

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射，不能使用过期产品。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

山羊微晶纤维素酶（MCCase）elisa试剂盒

(3)42只大鼠随机分为对照组、模型组（包括1h、6h、24h组）、GMTI组（包括1h、6h、24h组），每组6只。除对照组外，麻醉后开腹统一制作Ⅲ级胰损伤模型。GMTI组于病灶处直接注射 (10mg/ml，0.3ml/100g)，模型组于病灶处直接注射等量0.9％生理盐水。术后分别于1h、6h、24h处死大鼠并收集血液及胰组织，记录腹腔积液量，使用大鼠ELISA检测试剂盒测定血清AMS、CRP、脂肪酶(LPS)、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平，胰组织固定后行病理学检测。(4)5只比格犬，全麻后开腹统一制作Ⅲ级胰损伤模型，将十二指肠降段间断固定于右侧腹壁。分别于术后即刻、1d、2d、3d行超声造影检查。记录腹腔积液量。于术前、术后1d、2d、3d测定血清AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α、血WBC及尿TAP。术后3d取材行胰组织病理学检查。(5)15只比格犬全麻后开腹统一制作Ⅲ级胰损伤模型，超声造影引导下胰周留置引流管。随机分为模型组、GMTI组、GM组，每组5只。GMTI组于超声引导下经导管注射 至胰（4.63ml/10kg），GM组静脉滴注GM（4.625ml/10kg），模型组经导管注射等量0.9％生理盐水。分别于术后即刻、1d、2d、3d、7d行超声造影检查。记录腹腔积液量及引流量。于术前、术后1d、2d、3d、7d测定血清AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α、血WBC及尿TAP。术后7d取材行胰组织病理学检查。 　　结果: (1)泊洛沙姆P-407单独对胰蛋白酶活性无影响;与泊洛沙姆P-407相比，10mg/ml和20mg/mlGM及GMTI可完全抑制胰蚤白酶活性（P＜0.01）。(2)与对照组相比，PT组血清AMS、CRP、TAP水平显著增高(P＜0.01);与PT组相比，GM组AMS、CRP、TAP水平显著下降(P＜0.01)，10mg/ml和20mg/ml组GMTI可显著抑制AMS、CRP、TAP的表达(P＜0.01);4组GMTI均完全抑制了TAP的表达(P＜0.01)。PT组病理改变较GM组与GMTI组明显，出现胰水肿，部分腺泡及胰岛结构破坏，核深染，伴有炎细胞浸润及少量出血。

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(3)与对照组相比，PT组AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α水平均明显升高(P＜0.01);与PT组相比， GMTI组各指标均明显降低(P＜0.01);与GMTI组相比，造模后1h PT组各指标明显升高(P＜0.01)，GMTI组略下降(P＜0.01)，造模后6h与24h，PT组AMS活性明显升高(P＜0.01)，GMTI治疗组各指标明显降低(P＜0.01)。GMTI组较PT组腹水量明显减少（P＜0.01）。PT组镜下见大范围的腺泡结构破坏，间质脂肪组织坏死，炎细胞浸润及出血，GMTI组腺泡结构破坏程度明显减轻。(4)超声造影清晰显示创伤灶及活动性出血，创伤灶为双期无增强或低增强。腹腔积液量1d较多，3d下降，腹水AMS、LIP升高。造模后1d至3d，前述各指标均较术前升高，3d开始下降(P＜0.01，P＜0.05)。镜下见部分胰细胞肿胀变性，核深染，伴灶性出血、坏死灶及炎细胞浸润。(5)超声造影示GMTI组创伤灶未见进一步扩大，PT组可见活动性出血及脓肿形成。腹腔积液量随时间延长减少。GMTI组腹水AMS、LPS较GM组减低（P＜0.01）。两治疗组血清AMS、LPS、CRP及尿TAP较PT组减低（P＜0.01，P＜0.05）。GM与GMTI组间无显著差异。镜下三组均出现腺体细胞坏死及纤维化，以GMTI组略轻。 　　结论: GMTI体外可抑制胰蛋白酶活性且有效浓度与GM相当;GMTI体内对Ⅱ级和Ⅲ级大鼠胰损伤模型及比格犬Ⅲ级胰损伤模型均具有明显保护作用，与阳性 GM相当;超声造影引导下置管并局部注射GMTI治疗胰损伤可行，GMTI有效抑制胰酶活性，减轻了胰组织的炎症反应及病理改变。

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口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的高度接触性传染病,主要侵害偶蹄动物产生急性高热等症状。该病感染能力强,传播途径多,在多个国家和地区发生过大流行,严重阻碍了畜牧业发展。口蹄疫病毒有7个血清型,分别为O、A、C、Asia 1、SAT 1-3型,每个血清型又包含多个亚型,各型之间不存在交叉反应。我国的主要流行血清型为A型、O型和Asia 1型。2009至2013年间,在我国上海、湖北、武汉、新疆阿克苏地区以及周边国家多次爆发A型口蹄疫疫情,给当地经济带来了巨大的损失。为建立一种有效检测A型FMD的方法,首先需获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白。经过PCR扩增得到A型FMDVvp1基因片段,与原核表达载体pET-28a连接,构建重组质粒pET-A-vp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE及Western-Blot分析表明,A-VP1重组蛋白分子质量约为29 ku,能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别,蛋白表达正确。超声破碎后发现A-VP1蛋白以包涵体形式存在。通过对表达条件进行优化,发现在37℃条件下,OD600为0.6,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达6 h后,A-VP1蛋白的表达量 。ELISA检测结果显示A-VP1包涵体蛋白经过洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后活性较高。A型FMDVVP1活性蛋白的成功表达为进一步研制口蹄疫基因工程疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。以原核表达经纯化复性制备的A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白代替传统病毒抗原包被,建立快速、安全、有效的A型FMDV抗体ELISA检测试剂盒。对前期制备的A-VP1蛋白进行Westem-Blot检测,结果表明,A-VP1蛋白能够特异性识别A型FMDV阳性牛血清,可作为检测抗原建立检测A型FMDV抗体检测的方法。